T4 RNA Ligase 2, 30000 U/ml

Die T4 RNA Ligase 2 katalysiert die Ausbildung einer Phosphodiesterbindung zwischen einem 5‘ Phosphat- und einem 3‘ Hydroxylende der RNA. Doppelsträngige RNA mit Nick wird als Substrat bevorzugt, aber auch einzelsträngige RNA kann als Substrat verwendet werden. Eine Ligation der einzelsträngigen RNA Substrate generiert entweder intramolekulare oder intermolekulare Produkte. Neben doppelsträngigen RNA Substraten mit Nick können andere Nukleinsäurehybride mit Nick geschlossen werden. Der Strang, der das 5‘ Phosphat enthält, kann entweder DNA oder RNA sein. Der nicht ligierte Strang des Duplex kann ebenso entweder DNA oder RNA sein. Zur Aktivität der T4 RNA Ligase wird ATP benötigt, es sei denn, das Substrat ist am 5‘ Ende preadenyliert. Die modifizierte Version der T4 RNA Ligase 2 ist als Enzym besser für preadenylierte Substrate geeignet, da weniger Nebenreaktionsligationprodukte entstehen als mit dem unmodifizierten Enzym.

Unit Definition: Eine Unit wird als die Menge an Enzym definiert, die benötigt wird, um 50% von 0.4 µg eines äquimolaren Gemisches einer einzelsträngigen 5‘ FAM-markierten 17-mer RNA mit dem 5’phosphorylierten Ende eines 18-mer DNA-Oligonukleotids zu ligieren, wenn diese komplementär zu einem 35-mer DNA-Strang sind. Die Reaktion wird in 20 µl Volumen bei 37°C für 30 Minuten durchgeführt.

Inhalt des Kits:

T4 RNA Ligase 2 in:

• 10 mM Tris-HCl
• 100 mM NaCl
• 0.1 mM DTT
• 0.1 mM EDTA
• 50% Glycerol
• pH 7.5 @ 25°C
  

10X Ligationspuffer:

• 500 mM Tris-HCl
• 100 mM MgCl2
• 50 mM DTT
• 10 mM ATP
• pH 7.6 @ 25°C
  

Lagertemperatur: -25 bis -15°C