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Zell-freie Proteinexpression

Warum in vitro Translation?
e2052a_CellfreeWorklow_700
Spart Zeit, vereinfachte Handhabung, sicher:

  • Kein Klonieren – PCR Fragmente können als lineares Template verwendet werden
  • Keine Transformation, Selektion, Zellkultur
  • Kein Entstehen von genetisch modifizierten Organismen


Spezifisch
:

  • Nur das gewünschte Protein wird exprimiert


Flexibel:

  • Offenes und modifizierbares System: Zugabe von Chaperonen und Co-Faktoren möglich
  • Skalierbar von 50 µg bis 50 mg
  • High-Throughput geeignet


Hochspezifisches und offenes Labeling:

  • Radioaktiv-, Biotin- oder Fluoreszenz-gelabelte Proteine für Interaktions-, X-Ray oder NMR Analyse


Einfache Template Generierung:

  • Optimierte Kits für verschiedene Applikationen / Proteine


 
RTS: Rapid Translation System
Skalierbare Zell-freie Protein Expression in verschiedenen Systemen
E. coli, Wheat Germ und Insect

 Quick & Easy: Batch-Methode:

  • Screening
  • Optimierung
  • Parallele Expression von Varianten
  • Inkubationszeit 2-4 Stunden

e2052b_batch-methode
Zellfreie Expressionssysteme enthalten:

  • Alle Komponenten der Protein Expressionsmaschinerie
  • Energie Regenerationssystem
  • Kein Kern, Mitochondrien, mRNA, Cytoskelett
  • Nur eine mRNA: Gen-spezifisches Template



 
High Yield - CECF-Methode: (Continuous Exchange Cell-free Technology)

  •  Antigen Produktion
  •  Labeling für NMR, X-Ray
  •  Funktionales Testung
  •  Inkubationszeit bis zu 24 Stunden für hohe Ausbeuten

Das System besteht aus zwei Kammern, die durch eine semipermeable Membran getrennt sind. So werden Substrate und Energie der Reaktion kontinuierlich zugeführt und inhibierende Nebenprodukte abgeführt. Daraus resultiert: Längere Reaktionszeit = Höhere Ausbeute
e2052d_FeedingChamber_RTS_700 

 

Zellfreie Kits - Überblick: Merkmale von Proteinsynthese-Kits, Vektoren und Expressions-Templates (PDF)

 

 

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Zell-freie Proteinexpression

Warum in vitro Translation?
e2052a_CellfreeWorklow_700
Spart Zeit, vereinfachte Handhabung, sicher:

  • Kein Klonieren – PCR Fragmente können als lineares Template verwendet werden
  • Keine Transformation, Selektion, Zellkultur
  • Kein Entstehen von genetisch modifizierten Organismen


Spezifisch
:

  • Nur das gewünschte Protein wird exprimiert


Flexibel:

  • Offenes und modifizierbares System: Zugabe von Chaperonen und Co-Faktoren möglich
  • Skalierbar von 50 µg bis 50 mg
  • High-Throughput geeignet


Hochspezifisches und offenes Labeling:

  • Radioaktiv-, Biotin- oder Fluoreszenz-gelabelte Proteine für Interaktions-, X-Ray oder NMR Analyse


Einfache Template Generierung:

  • Optimierte Kits für verschiedene Applikationen / Proteine


 
RTS: Rapid Translation System
Skalierbare Zell-freie Protein Expression in verschiedenen Systemen
E. coli, Wheat Germ und Insect

 Quick & Easy: Batch-Methode:

  • Screening
  • Optimierung
  • Parallele Expression von Varianten
  • Inkubationszeit 2-4 Stunden

e2052b_batch-methode
Zellfreie Expressionssysteme enthalten:

  • Alle Komponenten der Protein Expressionsmaschinerie
  • Energie Regenerationssystem
  • Kein Kern, Mitochondrien, mRNA, Cytoskelett
  • Nur eine mRNA: Gen-spezifisches Template



 
High Yield - CECF-Methode: (Continuous Exchange Cell-free Technology)

  •  Antigen Produktion
  •  Labeling für NMR, X-Ray
  •  Funktionales Testung
  •  Inkubationszeit bis zu 24 Stunden für hohe Ausbeuten

Das System besteht aus zwei Kammern, die durch eine semipermeable Membran getrennt sind. So werden Substrate und Energie der Reaktion kontinuierlich zugeführt und inhibierende Nebenprodukte abgeführt. Daraus resultiert: Längere Reaktionszeit = Höhere Ausbeute
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