DNA-Glykosylasen (Glycosylasen) sind Enzyme, die spezifisch modifizierte Basen erkennen und diese dann hydrolytisch entfernen. Bei der DNA Reparatur spielen sie eine wichtige Rolle.
Die Heat Labile Uracil-DNA Glycosylase katalysiert spezifisch die Hydrolyse der N-glycosidischen Bindung zwischen Uracil und Zucker, dadurch entstehen alkaliempfindliche abasische Stellen in der DNA. Diese können durch Hitze oder alkalische Behandlung gespalten werden.
biotechrabbit™ Heat Labile Uracil-DNA Glycosylase baut uracilhaltige PCR-Produkte selektiv ab. Bei Verwendung entsprechender PCR Kits wird dTTP teilweise oder vollständig durch dUTP ersetzt. Vor der eigentlichen PCR Reaktion wird dem PCR Ansatz Uracil-N-Glycosylase (UNG) zugesetzt und bei 50°C inkubiert. Dabei entfernt die UNG Uracil von dUMP, das in kontaminierende Moleküle aus früheren PCR Reaktionen eingebaut wurde, und hinterlässt apyrimidinische Stellen. Während des Aktivierungsschritts der HotStartTaq-DNA-Polymerase wird das UNG inaktiviert, und die kontaminierenden Moleküle werden durch Hydrolyse des Phosphatrückgrats an den abasischen Stellen zerstört. Danach werden in der PCR nur die entsprechenden Fragmente aus der Probe amplifiziert; kontaminierende Moleküle aus früheren Reaktionen hingegen nicht.
