Wichtige Tools in der Molekularbiologie
Ligasen sind Enzyme, die Reaktionen katalysieren, bei denen unter Energieverbrauch zwei Moleküle miteinander verbunden werden. Die Ligation von DNA bzw. RNA ist in vielen molekularbiologischen Anwendungen ein entscheidender Schritt, welcher mit Hilfe einer DNA- oder RNA-Ligase bewerkstelligt wird.
Einige Applikationsbeispiele:
- Klonierung – Rapid Ligation mit blunt oder cohesive (sticky) ends
- Library Prep für NGS – Adaptor Ligation
- Ligase Chain Reaction – SNP Detektion
- Ligation von Nicks
- Zirkularisierung
Die folgende Tabelle gibt Ihnen einen detaillierten Überblick über die spezifischen Eigenschaften unserer bewährten Ligasen und erleichtert die Auswahl des richtigen Enzyms für Ihr erfolgreiches Experiment.
| Enzyme | Ligation Temp | Cofactor | Ligation Template Required to Ligate | Type of Ends Ligated Blunt/Cohesive | Primary Application | Heat Inactivation |
| T4 DNA Ligase Rapid (351100301, 351100302) | 25°C | ATP | No | Yes/Yes | Rapid Ligation | 10 min, 70°C |
| T4 DNA Ligase (Rapid) (280225) | 25°C | ATP | No | Yes/Yes | Rapid Ligation | |
| T4 DNA Ligase (280220) | 4°C-25°C | ATP | No | Yes/yes | Cloning | 15 min, 65°C |
| T3 DNA Ligase (280210) | 20°C | ATP | No | Yes/Yes | Tolerates High Ionic Strength | |
| T7 DNA Ligase (280250) | 25°C | ATP | No | Yes/Yes | 1000 fold higher activity on sticky ends than blunt ends | |
| E. coli DNA Ligase (280200) | 5°C-25°C | NAD | Yes; DNA only | Weak activity/yes | Ligation of nicks in dsDNA, make long cDNA | 20 min, 65°C |
| Ampligase (111075, 110250) | 45°-70°C | NAD | Yes; DNA only | No/yes | Ligation of adjacent 3´-hydroxylated and 5´-phosphorylated termini in duplex DNA structures, LCR, LDR, SNP detection | No; half-life >1h, 95°C |
| Taq DNA Ligase (280260) | 45°-65°C | NAD | Yes; DNA only | No/yes | Ligase Chain reaction | No; half-life 30 min, 95°C |
| CircLigase ssDNA Ligase (131401, 131405) | 60 °C | ATP | No | N/A | Circularizes ssDNA or ssRNA >30 bases long | 10 min 80°C |
| CircLigase II ssDNA Ligase (131402, 131406) | 60 °C | None | No | N/A | Circularizes ssRNA or ssDNA >15 bases long | 10 min 80°C |
| T4 RNA Ligase truncated (280245) | 37°C | None | No | N/A | Preadenylated 5′ ends of DNA or RNA are ligated to the 3′ ends of RNA | |
| T4 RNA Ligase 2 (280240) | 37°C | ATP | No | No | Ligating dsRNA nicks and ssRNA to ssRNA | |
| T4 RNA Ligase 1 (280230) | 37°C | ATP | No | n/A | Ligate ssRNA to ssRNA or ssDNA |
