Wir bieten ein ausgesuchtes Portfolio an Produkten von renommierten Herstellern in Bereich der in vitro Transkription an.

Die Mission der Firma CELLSCRIPT™ besteht darin, die besten Produkte und Technologien für die Herstellung und Verwendung von RNA für die Translation in Zellen in der klinischen Forschung bereitzustellen.

Dazu gehören Kits für die in vitro Transkription, 5'-RNA-Capping unter Verwendung von entweder einem Cap-Analog oder Capping-Enzymen und 3'-RNA-Polyadenylierung sowie All-in-One-Kits zur Herstellung von gecappter, poly(A)-tailed mRNA für die Translation in Zellen.
Die Firma Lucigen bietet mit dem DuraScribe Kit die Möglichkeit vollständig RNase A-resistente RNA Herzustellen. Diese eignet sich perfekt für die RNA-Aptamer-Synthese sowie Antisense-RNA- und RNA-Interferenz (RNAi)-Experimente.

in vitro Transkription

Herstellung von RNA

Die T7-Flash™ Transcription Kits wurden speziell entwickelt, um eine maximal mögliche RNA-Ausbeute in einer in vitro Transkriptionsreaktion (IVT) in nur 30 Minuten zu erhalten. Unter Standard Reaktionsbedingungen (30 Minuten, 20 µl Reaktion, 1 µg Control Template) können bis zu 180 µg RNA hergestellt werden.
Die T7-Flash Transcription Kits produzieren auch außergewöhnlich hohe Ausbeuten an langen oder kurzen Transkripten. Für die Produktion von RNA-Mengen im Milligramm Bereich, kann die Standardreaktion einfach scaliert werden. Das Kit kann auch im klassischen „Eberwein“ Prozess eingesetzt werden.

RNase A resistente RNA

Das DuraScribe® T7 Transcription Kit* ist ein in vitro Transkriptionskit, das RNA produziert – sogenannte DuraScript® RNA – die vollständig resistent gegen RNase A-Verdau ist.
Das DuraScribe T7 Transcription Kit enthält die DuraScribe T7 RNA Polymerase, eine verbesserte Formulierung der Y639F-Mutante1 der T7 RNA Polymerase, die effizient aus 2´-Fluorin-CTP (2´-F-dCTP), 2´-Fluorin-UTP (2´- F-dUTP), ATP und GTP in RNase-resistente RNA-Transkripte namens DuraScript RNA, synthetisiert. Die DuraScribe T7-RNA-Polymerase verwendet die gleichen T7-Promotoren wie die Wildtyp T7 RNA Polymerase.
Diese RNase A-resistente RNA eignet sich perfekt für die RNA-Aptamer-Synthese sowie Antisense-RNA- und RNA-Interferenz (RNAi)-Experimente.

Capping von RNA

Es gibt zwei Arten von Capping-Systemen:

1. Co-transkriptional: Das Cap wird während der in vitro Transkription (IVT) angebaut.

Das MessageMAX™ T7 ARCA-Capped Message Transcription Kit produziert in vitro transkribierte gecappte RNA unter Verwendung der T7-RNA-Polymerase und dem Anti-Reverse-Cap-Analogon (ARCA) m27,3'-OG[5']ppp[5']. Eine 30 Minuten, 20 μl MessageMAX-Reaktion ergibt bis zu 60 μg ARCA-gekappte RNA aus nur 1 μg der 1,4 kb Standard-T7-Kontroll-Template DNA.

Da das ARCA eine 3'-O-Methylgruppe am m7G-Nukleotid enthält, kann dieses Cap im Gegensatz zu einem Standard Cap nur in der richtigen Orientierung am 5'-Ende der RNA während einer in vitro-Transkriptions-/Capping-Reaktion eingebaut werden.

2. Separat nach der Transkription, auch mit Poly(A)-Tail

Das T7 mScript™ Standard mRNA-Produktionssystem bietet Ihnen alle Enzyme und enzymbezogenen Reagenzien zur Herstellung von 5'-gecappter, 3'-polyadenylierter mRNA.

Das T7 mScript™ Standard mRNA-Produktionssystem enthält Module für

• in vitro Transkription von linearen doppelsträngigen DNA-Templates mit der mScript T7 Enzymlösung und die kanonischen Nukleotide ATP, CTP, GTP und UTP
• enzymatisches Capping der RNA mit ScriptCap™ Capping Enzyme System (zur Herstellung von mRNA mit einer Cap-0-Cap-Struktur)
• ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase (zur optionalen Herstellung von mRNA mit einer Cap-1-Cap-Struktur)
• A-Plus™ Poly(A) Polymerase zum Hinzufügen eines 3'-Poly(A)-Tails.

Nach der Transfektion hat gecappte und mit einem PolyA-Tail versehene mRNA in den meisten Fällen eine höhere Stabilität und damit auch höhere Translationseffizienz in eukaryotischen Zelllinien als nicht modifizierte RNA. Das mScript-System hat gegenüber anderen Capping-Methoden den Vorteil, dass bei höherer Ausbeute die Capping Effizienz nahezu 100 % beträgt und alle „Cap-Strukturen“ die richtige Orientierung ausweisen.
Diese mRNA eignet sich für Transfektions- und Mikroinjektions-Experimente sowie in vitro Translationssysteme.
Die Module sind auch einzeln erhältlich.

Überblick über die erhältlichen Transkriptions- und Capping-Kits