Was ist Zellviabilität?
Viability, auch Zellviabilität genannt, bezeichnet den Anteil lebender Zellen in einer Zellpopulation. Dabei wird die Viability als Prozent der lebenden Zellen im Verhältnis zur Gesamtheit aller (toten und lebendigen) Zellen in der Probe angegeben.
Welche Methode ist geeignet für die Bestimmung des Lebendanteils, also der Viability?
Trypanblau (TB) ist seit langem der Standard für eine selektive Färbung toter Zellen und Gewebe. Bei einigen Zelltypen können jedoch Fluoreszenzanalysen, zum Beispiel mit Acridinorange (AO) und Propidiumiodid (PI), genauere Ergebnisse liefern.
| Trypanblau
| AO/PI Fluoreszenz Lebende Zellen: |
Lebende Zellen: Trypanblau kann nicht durch intakte Zellmembranen dringen, daher bleiben lebende Zellen ungefärbt.
AO durchdringt die Zellmembran und färbt lebende Zellen, so dass sie grün fluoreszierenWelche Methode für welche Zelltypen?
Trypanblau oder AO/PI:
| AO/PI empfohlen:
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| Trypanblau-Zellzählung Lebende Zellen im Hellfeld zeigen ein helles Zentrum mit einer schwarzen Membran. Trypanblau färbt tote Zellen dunkel. | AO/PI-Zellzählung Mit AO/PI gefärbte Zellen fluoreszieren entweder grün (lebend) oder rot (tot). |
Datenvergleich für Trypanblau und AO/PI | |
| Mit Trypanblau und AO/PI gezählte CHO-Zellen.
| Mit Trypanblau und AO/PI gezählte PBMCs.
Mit AO/PI werden PBMCs genau gezählt. Die Zellzahlen werden beim Zählen mit Trypanblau überschätzt, da Zelltrümmer und kernlose rote Blutkörperchen falsch gezählt werden. |
Zusammenfassung – Trypanblau oder AO/PI?
Hellfeldmessungen mit Trypanblau eignen sich hervorragend für die schnelle Ermittlung der Zellzahl und Lebensfähigkeit von Zellproben mit minimalen Zelltrümmern. Der Farbstoff ist jedoch nur begrenzt in der Lage, Zellen vom Hintergrund oder von Zelltrümmern zu unterscheiden. Duale Fluoreszenzmessungen mit AO/PI ermöglichen die spezifische Identifizierung lebender und toter Zellen in Gegenwart einer großen Anzahl kernloser Zellen und Zelltrümmern und beseitigen die mit kolorimetrischen Farbstoffen verbundene Subjektivität.
Good to know:
Der Einsatz automatischer Cell Counter, wie z.B. dem CellDrop, zur Bestimmung der Viability entfernt nicht nur die Subjektivität aus dem Prozess, sondern beschleunigt
den Arbeitsablauf und ermöglicht anpassbare Berichte und Datenarchivierung.
Übrigens: Trypanblau ist zwar ein bewährter Farbstoff zur Zellzählung, gilt aber als gesundheitsschädlich und zytotoxisch. Erythrosin B ist ein biologisch sicherer und ungiftiger kolorimetrischer Farbstoff, der mit ähnlichem Funktionsprinzip als Alternative zu Trypanblau für Zellzählung und Beurteilung der Viability verwendet werden kann.
