Die Recombinase Polymerase Reaktion (RPA) ist eine innovative isothermale Amplifikationstechnologie, die es ermöglicht, DNA oder auch RNA in kürzester Zeit effizient zu vervielfältigen. Im Gegensatz zu herkömmlichen PCR-Methoden benötigt RPA keine Thermocycler was sie besonders flexibel und einfach in der Anwendung macht. Durch die Kombination von Recombinase, Single-Strand-Bindungsprotein und Strand Displacing DNA-Polymerase ermöglicht RPA eine effiziente und spezifische Vervielfältigung von Ziel-DNA. RNA kann mit Hilfe der RT-RPA amplifiziert werden. Hier kommt noch ein weiteres Enzym, eine Reverse Transkriptase, zum Einsatz.
Mit RPA können Sie in nur 20 Minuten präzise Ergebnisse erzielen – ideal für schnelle Diagnosen, Umweltanalysen oder Point-of-Care-Tests. Die hohe Sensitivität und Spezifität der Methode garantieren zuverlässige Nachweise selbst bei geringsten DNA-Mengen.
Unsere RPA-Produkte sind benutzerfreundlich, robust und vielseitig einsetzbar. Sie eignen sich hervorragend für eine Vielzahl von Anwendungen, darunter Pathogen-Detektion, genetische Forschung und Qualitätskontrolle.
Vorteile:
- Isothermale Amplifikation: Reaktion bei konstanter Temperatur (37-42°C), keine Notwendigkeit für einen Thermocycler.
- Schnelle Ergebnisse: Die Amplifikation kann in nur 10-20 Minuten durchgeführt werden.
- Hohe Sensitivität: Nachweis von bis zu 100 DNA- oder RNA-Kopien.
- Vielseitige Anwendungen: Geeignet für Forschung, Diagnostik und Point-of-Care-Tests
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Links: 168 bp Amplikon, erzeugt mit biotechrabbits RPA Basic Master Mix, dargestellt in einem Agarosegel:
Rechts: Amplifikationseffizienz und -geschwindigkeit demonstriert mit biotechrabbits RPA Exo Master Mix.
Vergleich: RPA vs. PCR
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| RPA | PCR |
| Temperatur | Isothermal (37-42°C) | Thermischer Zyklus (typischerweise 95°C, 60°C, 72°C) |
| Geschwindigkeit | Ergebnis in 10-20 Minuten | 1-2 Stunden |
| Ausrüstung | Heizblock | Thermocycler |
| Transportabel | Einfach-ideal für Feldversuche | eingeschränkt |
| Sensitivität | Hohe Empfindlichkeit, wenige DNA/RNA-Kopien erforderlich | Hoch, erfordert aber oft saubere Proben |
| Anwendungen | Point-of-Care, Diagnostik, Feldversuche | Labordiagnostik und Forschung |
Tipp: Schauen Sie sich unsere Auswahl an passenden Heizblöcken an.
Produkte zur Recombinase Polymerase Reaktion (RPA) kaufen
Biozym bietet Ihnen sowohl Mastermixe, als auch die Einzelkomponenten für die Recombinase Polymerase Amplification an. Als Ausgangsmaterial kann DNA oder auch RNA für die RT RPA eingesetzt werden.
Der praktische 2X-Mastermix vereinfacht die Reaktionsvorbereitung, da bereits alle wesentlichen Enzym- und Pufferkomponenten in einem einzigen, leicht rekonstituierbaren Pellet vorliegen.
Ein Überblick der Kits und Einzelkomponenten
Einzelkomponenten
| Art. Nr | Bezeichnung | Verpackung |
| 351500101 | LYO-ready Exonuclease III, 100 U/µl | 10.000 U |
| 351500201 | LYO-ready T6 UvsX DNA Recombinase, 5 mg/ml | 100 µg |
| 351500301 | LYO-ready T4 UvsY Protein, 2 mg/ml | 100 µg |
| 351500401 | LYO-ready RB69 Gene 32 Protein, 10 mg/ml | 500 µg |
| 351500501 | LYO-ready T4 Gene 32 Protein, 10 mg/ml | 500 µg |
Kits
| Art. Nr | Bezeichnung | Verpackung |
| 351600100 | 2X RPA Basic Master Mix, lyophilized | 8 rxn of 50 µl |
| 351600200 | 2X RPA Exo Master Mix, lyophilized | 8 rxn of 50 µl |
| 351600300 | 2X RT-RPA Basic Master Mix, lyophilized | 8 rxn of 50 µl |
| 351600400 | 2X RT-RPA exo Master Mix, lyophilized | 8 rxn of 50 µl |
Exo vs. Non-Exo Mixes
Exo Master Mix
- Ermöglicht die Fluoreszenzdetektion in Echtzeit für quantitative Analysen.
- Single- oder Multiplex Reaktionen
- Ideal für empfindliche Anwendungen wie die Überwachung der Pathogenbelastung.
- Diese Reaktion erfordert eine Target spezifische Sonde, die von Exonuklease III geschnitten wird, sowie spezifische Primer.
Non-Exo (Basic) Master Mix
- Entwickelt für die Endpunkt-Detektion mittels kolorimetrischer oder gel-basierter Methoden.
- Kostengünstig für einfachere Arbeitsabläufe.
Die lyophilisierten Mastermixe bieten folgende Vorteile:
- Stabil- Versand und die Lagerung bei Raumtemperatur
- Hochgereinigte, qualitätskontrollierte Enzyme für konsistente und reproduzierbare Ergebnisse
- Frei von kontaminierender DNA und Nukleasen für eine saubere Amplifikation mit minimalem Hintergrund
- Vereinfachtes Reaktions-Setup durch 2X-Mastermix: alle wesentlichen Enzym- und Pufferkomponenten sind in einem einzigen, leicht zu rekonstituierenden Pellet
FAQs:
Haben die lyophilisierte Mastermixe eine Auswirkung auf meine Ergebnisse?
Da die Zusammensetzung standardisiert ist, sorgen lyophilisierte Mastermixe für reproduzierbare und zuverlässige Resultate bei jeder Anwendung. Sie erhalten konsistente Ergebnisse.
Kann die RPA für die qualitative und quantitative Analyse verwendet werden?
Ja, sie kann sowohl für die reine Nachweisdiagnose (qualitativ)-hier bieten sich die Basic Master Mixe an, als auch für die Quantifizierung der Ziel-DNA (quantitativ) mit den Exo Master Mixen genutzt werden.
Kann mit der RPA auch mRNA nachgewiesen werden?
Ja, hier kommt noch ein weiteres Enzym zum Einsatz: die Reverse Transkriptase. Biotechrabbit bietet auch hier fertige RT Master Mixe an.
