Überblick:   Das ExactStart™ Full-Length cDNA Library Cloning Kit dient zur Klonierung von cDNA aus Full-Length mRNA. Diese Full-Length cDNAs ermöglichen die Untersuchung der präzisen 5’ and 3’ Enden der mRNA. (Ablaufschema siehe Abbildung)   Anwendungen: Herstellung von Full-Length cDNA Libraries aus Gesamt-RNA oder angereicherter mRNA. Identifizierung von exakten Transkriptions-Startpunkten Alternative Splicing Studien Präparation vonTemplates für Next-Gen Sequencing Vorteile: Starke Selektion von Full-Length Transkripten (mit exakten 5´ Nukleotiden) Zur Herstellung der Full-Length cDNA Library schon ab 1 mg RNA Kein Einbau von Template-unabhängigen Nukleotiden während des „Tagging“-Prozesses One-Tube Format- ohne Aufreinigungsschritte Kit enthält CDC-1K™ Cloning-Ready Vector (precut; zur Klonierung der „getagten“ cDNA in die seltenen Asc I und Not I Restriktionsschnittstellen)       Art.-Nr. Epicentre Art.-Nr. Produktbezeichnung Verpackung 191610 ES0907 ExactStart™ Full-Length cDNA Library Cloning Kit 10 Reaktionen   Inhalt: ExactStart 10 X TAP Puffer, TAP Enzym, ScriptGuard™ RNase Inhibitor, ExactStart 10X Ligase mit  RT Puffer, ExactStart 20X TAP Stop Puffer, ExactStart RNA Acceptor Oligo, 2 mM ATP, T4 RNA Ligase, ExactStart 1st sStand Primer, 10mM each dNTPs, MMLV RT, ExactStart RNase Mix, ExactStart PCR Primer 1, ExactStart PCR Primer 2, Fast-Link 10 X Ligase Puffer, Fast-Link Ligase, 10 mM ATP, pCDC-1K Cloning Vector, Nuclease-freies Wasser, DNA Fragment 2X Precipitation Lösung, ExactStart RNA Control Transcript (100 ng/µl)   Nicht im Kit enthalten: PCR Enzymsystem (Proof-reading Enzyme sinnvoll) Asc I Restriktionsenzym (10 U/ml); Not I Restriktionsenzym (10 U/ml); 24:1 Chloroform:Isoamyl Alkohol; 1:1 Phenol (gepuffert) : Chloroform; kompetente E. coli Zellen SOC (o.Ä. Transformation Recovery Medium), LB/Kanamycin Agar (50 mg/ml)