INCOGNITO™ T7-FlashScribe™ psi-RNA

INCOGNITO™ T7-FlashScribe™ psi-RNA Transcription Kit

Das INCOGNITO™ T7-FlashScribe™ psi-RNA Transcription Kit ist für die Synthese von Pseudouridin-haltiger RNA (psi-RNA) aus einer In-vitro-Transkriptionsreaktion (IVT) optimiert. Obwohl die Ausbeute je nach DNA-Template und anderen Faktoren variiert, liefert eine standardmäßige einstündige 20-µl-Reaktion dank der hohen Leistungsfähigkeit des T7-FlashScribe™-Enzyms bis zu 160 µg RNA aus 1 µg Kontroll-Template. Die Standardreaktion kann hochskaliert werden, um Milligramm-Mengen an RNA zu produzieren, die die kanonischen Nukleotide ATP, CTP und GTP sowie dem modifizierten Nukleotide N1-Methyl-Pseudouridin-5'-triphosphat (psiTP) enthalten.

Was ist der Vorteil der Verwendung von modifizierten Nukleotiden bei der RNA Synthese?

Modifizierte psi-RNA s führen im Vergleich zu nicht modifizierten mRNAs zu höheren Proteinkonzentrationen und geringeren angeborenen Immunreaktionen in menschlichen und anderen Säugetierzellen, die verschiedene RNA-Sensoren exprimieren.

INCOGNITO™ T7 IVT psi-RNA kann durch Verwendung des ScriptCap™ Cap 1 Capping-Systems von CELLSCRIPT™ (enthält sowohl ScriptCap™ Capping-Enzym als auch 2'-O-Methyltransferase) und A-Plus™ Poly (A) Polymerase Tailing Kit (separat erhältlich) zu mRNA mit geringer Immunogenität weiterverarbeitet werden.

Um die Immunogenität maximal zu reduzieren, kombinieren Sie INCOGNITO™ T7 IVT psi-RNA mit dem Min-Immune™ Gold dsRNA Removal Kit, um nahezu dsRNA-freie mRNA mit extrem geringer Immunogenität herzustellen, die für nachgeschaltete Anwendungen wie Zell- und Gentherapieforschung und die Entwicklung von mRNA-Impfstoffen geeignet ist.

Die Vorteile zusammengefasst:

• Schnelles Protokoll mit hoher Ausbeute: Erträgt bis zu 160 µg psi-RNA aus 1 µg DNA-Template in nur einer Stunde.
• Geringere Immunogenität: Synthetisierte Transkripte enthalten die psi-Modifikation für eine reduzierte Immunantwort.
• Skalierbar: Die Standardreaktion kann hochskaliert werden, um Milligramm-Mengen an psi-RNA zu produzieren.

Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt (RUO).

Nutzungs- und Labellizenzen für bestimmte Produkte: Der Käufer erhält ein beschränktes, nicht exklusives, nicht übertragbares Recht, die von CELLSCRIPT™ gekauften Produkte ausschließlich für eigene interne Forschungszwecke im Labor zu nutzen. Weitere Informationen finden Sie unter Label License: www.cellscript.com/terms-conditions/

Produkt-Performance:

Die Standardreaktion von 60 Minuten und 20 µl wurde für die Transkription unter Verwendung von 1 µg linearisierter DNA-Matrize optimiert. Die Inkubationszeiten können jedoch bei Bedarf angepasst werden. Tabelle 1 fasst die Transkriptionsergebnisse mit 1 µg der Kontroll-Template-DNA in einer Standardreaktion mit Inkubationszeiten von 20 bis 120 Minuten zusammen. Die Ergebnisse können je nach verwendetem Template variieren.

Tabelle 1. IVT-RNA-Ausbeuten aus Reaktionen mit dem INCOGNITO™ T7-FlashScribe™ psi-RNA-Transkriptionskit, die zwischen 20 und 120 Minuten inkubiert wurden. Das Standardprotokoll sieht eine Inkubationszeit von 60 Minuten vor.

Mitgelieferte Materialien:

Wichtig Bei -20 °C in einem Gefrierschrank ohne Abtaufunktion lagern. Nicht bei -70 °C lagern.

T7-Kontroll-Template-DNA: Ist ein linearisiertes 4,1-kb-Plasmid, das einen T7-Promotor gefolgt von einem Phagen-Lambda-dsDNA-Insert enthält, das ein 1.375 Basen langes Runoff-Transkript kodiert. Die Kontroll-Template-DNA wird in einer Konzentration von 0,5 µg/µl in T10E1-Puffer (10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 1 mM EDTA) geliefert.

Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien

• Eine DNA-Matrize für die Transkription Ihrer RNA von Interesse.
• Materialien oder Kits zur Reinigung des RNA-Produkts.
• RNase-freier TE-Puffer (10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 1 mM EDTA).